服务介绍：

和元生物技术服务团队由多位中科院及国内著名院校博士组建和管理。多年的技术研发，积累了丰富的技术储备，可为您提供高质量整体课题机制研究实验设计和数据分析服务。现有细胞株约400余株，同时与ATCC和中科院细胞库建立长期稳定的合作关系。

目前，可提供稳转细胞株筛选 、敲除细胞株构建 、靶基因验证 、启动子活性验证 、Pulldown 、有效靶点筛选、细胞凋亡检测、细胞增殖检测、细胞周期检测 、细胞侵袭实验 、细胞迁移/细胞划痕实验等细胞一站式技术服务。

服务内容：

• 一、稳定细胞株构建
• 筛选方法
• 慢病毒感染筛选稳定细胞株：利用慢病毒整合表达特性来筛选稳定细胞株，该方法克服了传统质粒挑单克隆方法周期久的弊端，可以在短时间内高效获取稳定细胞株。
• （1）细胞适用种类广泛，可用于各种哺乳动物细胞；
• （2）构建稳转株时间短，表达持续时间长；
• （3）多种荧光标记和抗性基因可选，满足观测实验要求。
• 服务流程
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• 相关技术服务
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• 二、敲除细胞株构建

  CRISPR/Cas9系统其突变效率高、灵活简单，周期短，成本低，已经被广泛的应用于基因编辑的研究。CRISPR/Cas9系统应用的领域是基因敲除株系构建和基因敲除动物的研究。

  公司可提供项目服务包括：CRISPR/Cas9实验方案设计、CRISPR/Cas9基因敲除载体构建、CRISPR/Cas9基因敲除载体病毒包装、CRISPR/Cas9基因敲除细胞株构建

  服务特点：

  1 定制特定基因敲除细胞系只需提供基因名称；

  2 快速获得有效sgRNA，基因编辑效率高；

  3 实验周期短；

  4 可根据需要提供CRISPR/Cas9慢病毒包装服务

  操作流程

  1 靶向目的序列sgRNA的设计、载体构建及活性验证

  2 目的细胞系共转染，初步筛选混合克隆

  3 铺单克隆，单克隆筛选及鉴定细胞基因型

  4 阳性细胞株的扩增

  
  

  三、细胞功能学实验

• （1）细胞增殖

•        目的：考察目的基因对细胞的增殖能力产生的影响或药物对细胞增殖能力的影响
  　　材料：目的细胞、稳转株（空载、目的基因）
  　　步骤：细胞收集——细胞铺板——（药物处理）——细胞培养0、6、24、48、72小时后加入CCK-8处理，酶标仪检测
          步骤：细胞收集——细胞铺板——（药物处理）——细胞培养0、24、48、72、96小时后加入CellTiter-Glo™溶液用微孔板震荡器5分钟，于室温放置10分钟-酶标仪检测荧光值
  （2）细胞凋亡
  　　目的： 通过慢病毒感染获得过表达某基因的细胞株，利用Annexin-PE和7-AAD双染法对正常细胞、对照组细胞、基因过表达组细胞的凋亡情况进行检测，研究基因对细胞凋亡的影响。
  　　材料：质粒与细胞株
  　　步骤：细胞准备——收集细胞——Annexin-PE和 7-AAD进行双染色——流式上机检测
  （3）细胞侵袭和迁移
         目的： 研究目的基因过表达/干扰对细胞侵袭、转移能力的影响
  　　材料：正常细胞、对照慢病毒、过表达基因慢病毒
  　　步骤：细胞复苏——Transwell铺板——细胞培养及染色——拍照
  （4）划痕实验
  　　目的： 使用筛选的稳定株（转对照病毒、过表达基因病毒），通过对空细胞、对照稳转、目的基因稳转三组细胞进行划痕宽度进行统计学分析，研究基因对细胞迁移能力的影响。
  　　材料：病毒和细胞株，目的细胞来源于客户，稳定株和元构建
        步骤：细胞铺板——划线——细胞培养及拍照——统计分析
  （5）细胞周期检测
  　　目的： 通过慢病毒感染获得基因过表达的细胞株，利用PI染色法结合流式细胞术检测各组细胞周期的变化。从而研究目的基因对细胞周期的影响。
  　　材料：目的细胞、病毒
  　　步骤：细胞准备——样品收集——上机检测——数据分析
  （6）克隆形成实验
  　　目的：通过目的基因过表达/干扰细胞组、空细胞组与阴性对照组(空病毒)克隆形成数量的统计学分析，研究基因对细胞群体依赖性和增殖能力的影响。
  　　材料：病毒和细胞株
          步骤：铺板——细胞培养——观察克隆，染色，计算克隆形成率
  
  四、萤光素酶报告基因检测

• （1）miRNA靶基因验证
  　　目的：验证 miRNA与靶基因3’UTR 是否发生调控作用。
  　　材料：质粒pMIR-REPORT Luciferase基因3'UTR（Wt）；pMIR-REPORT Luciferase-基因3'UTR（Mut）；pRL-CMV（H321，Promega）；293T细胞株
  　　步骤：靶点预测——构建质粒——转染细胞检测——报告基因检测（Luciferase活性检测）——统计分析
  
  （2）启动子活性研究
  　　目的：检测转录因子对目的基因启动子活性的影响
  　　材料：实验质粒（pGL4.10-基因promotor）；对照质粒； pRL-CMV（E2261，Promega）；转录因子质粒；293T细胞株
  　　步骤：靶点预测——构建质粒——转染细胞检测——报告基因检测（Luciferase活性检测）——统计分析
  
  客户需提供信息：
  　　1 靶基因名称
  　　2 靶基因种属
  　　3 调控因子（miRNA或者转录因子）名称
  提供给客户：
  　　1 结合位点预测结果
  　　2 质粒及其构建报告
  　　3 双荧光素酶检测报告
  
  
  

• 联系人：张女士
  地址：上海市浦东新区国际医学园区紫萍路908弄19号楼
  邮编：201321
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  手机：15800353038
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