服务简介：

1) 差速超速离心分离；

2) 透射电镜拍摄（TEM）；

3) 纳米粒径跟踪分析（NTA）；

4) Western Blot检测蛋白标志物；

5) 外泌体高通量测序/芯片；

6) 外泌体标记或示踪；

7) 外泌体细胞功能检测；

8) 外泌体动物注射；

9) 外泌体动物模型验证等。

服务内容：

外泌体分离之后，需要经过一系列鉴定才能确定分离的是外泌体。鉴定方法从物理特征到表面分子标志物，多角度进行鉴定。

1.透射电镜鉴定法：简称TEM，适合外泌体双层囊膜超微结构观察，即通常为茶托型或一侧凹陷的半球形。

2.纳米颗粒跟踪分析法：简称NTA，该方法能保证外泌体原始状态、检测速度快，检测后能提供外泌体粒径和浓度信息。

3.Westernblot分子标志物检测：CD9、CD63、CD81、ALIX、TSG101、HSP70、HSP90及细胞分泌的特异性蛋白等。

4.外泌体高通量分析：miRNA高通量测序、mRNA高通量测序、lncRNA芯片（人、小鼠）、circRNA芯片（人、小鼠）、蛋白质组分析（iTRAQ、TMT、Label-free）。

5.外泌体标记或示踪：目前常用亲脂性染料对外泌体进行标记，亲脂性染料主要包括两类，第一类是PKH67（绿色荧光）/PKH26（红色荧光），由于它们可以与外泌体的脂质双层膜稳定结合，所以染色效果较好，应用较广泛。第二类是Di系列的亲脂性染料，包括DiI（橙色荧光）、DiO（绿色荧光）、DiD（红色荧光）、DiR（深红色荧光）。其中DiR的红外荧光可穿透细胞和组织，在活体成像中用来示踪。

6. l 慢病毒介导CD63-GFP表达：将外泌体的特定蛋白CD63和绿色荧光蛋白GFP的表达元件构建成质粒再包装到慢病毒中，随后用此慢病毒感染细胞，使细胞分泌的外泌体带有绿色荧光。

7.外泌体功能研究：将标记的外泌体加入受体细胞培养基中，与受体细胞进行共培养，观察细胞的功能变化，如细胞增殖、迁移与侵袭、细胞凋亡等；或者将外泌体注射入动物模型中，观察动物表型变化和检测动物相关指标。

我们的优势：

1) 实验周期短；

2) 价格优惠；

3) 完善的售后服务；

4) 项目经验丰富，成功率几乎100%；

5) 完整的一套实验服务。

服务周期：5-10个工作日

样本保存、分离等注意事项：

（1）样本预处理与外泌体分离、保存：

外泌体存在于人类或动物的各种体液中，我们可以选择不同的样本来源进行相关的外泌体研究。由于外泌体是来源于细胞质膜内陷的含有脂质双分子层膜结构的多泡小体，分布于胞外基质。为了获得高纯度的外泌体，必须确保有效去除所有的细胞碎片及其他不需要的杂质。

1） 细胞培养上清                  2）血浆/血清

3）尿液                           4）脑脊液

5）卵泡液                         6）宫腔液

7）胆汁                           8）羊水

9）腹水                           10）胸腔液

不同的实验样本采集时需要注意的地方不一样，如细胞培养上清在收集样本前需换成无外泌体血清培养、血浆样本采集时用一定不能用肝素抗凝管、尿液收集时需要加抑菌剂等。

从生物体液中分离外泌体的各种方法已经被开发出来，主要根据外泌体的大小、密度、免疫特性等特点进行操作。分离出高纯度的外泌体是我们后续开展外泌体研究的关键步骤，目前差速超速离心是外泌体分离方法中公认的“金标准”，也是高分文章中首选的分离方法。

（2）外泌体的保存方法：外泌体提取在短时间（一周之内）使用，可以放在4度保存，如果长时间保存可以放在-20度或-80度保存。也可以将外泌体进行分装，分别放在-20度或-80度。

联系人：张女士

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